Traitement intracérébroventriculaire à la résinifératoxine pour la désensibilisation au TRPV1 dans le cerveau de la souris

Résumé

Source : Fukushima, A., et al. Traitement intracérébroventriculaire avec de la résinifératoxine et tests de douleur chez la souris. J. Vis. Exp. (2020)

Cette vidéo montre la procédure d’injection intra-ventriculaire de résinifératoxine chez la souris pour désensibiliser les récepteurs TRPV1 dans le cerveau.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Injection intra-ventriculaire de RTX

1. Anesthésie les souris avec du sel de sodium pentobarbital (60 mg/kg, intrapéritonéale) et vérifie la perte du réflexe de redressement.
2. Pour le traitement intracérébroventriculaire (i.c.v.), injecter 5 μL de résinifératoxine (RTX) (20 μg/mL) dans le ventricule latéral droit. Pour le groupe témoin, injecter le véhicule (10 % d’éthanol, 10 % de monooléate de sorbitan de polyoxyéthylène (20) et 80 % de liquide céphalo-rachidien artificiel (ACSF)) de la même manière.
   1. Passez une aiguille jetable de 27-G dans un tube métallique (0,8 mm de diamètre intérieur) pour exposer la pointe de 3,0 à 3,5 mm de l’aiguille (figure 1A).
   2. Désinfectez la tête de la souris avec de l’alcool à 70 % et tenez fermement les os squamosaux de la souris avec les doigts (Figure 1B). note: Faites attention aux positions des protubérances squamosales, car ces protubérances serviront de repères pour l’injection.
   3. Déplacez l’aiguille latéralement sur le cuir chevelu et trouvez la suture sagittale lorsque la pointe de l’aiguille est accrochée à la suture.
   4. Déplacez l’extrémité d’environ 1 mm vers la droite, puis déplacez l’extrémité rostrallye et trouvez la suture coronale. (Figure 1B).
   5. Insérez l’aiguille lentement et verticalement, injectez la solution RTX en 10 secondes environ et maintenez-la pendant environ 10 secondes.
   6. Retirez lentement l’aiguille et remettez la souris dans sa cage d’origine. Les saignements sont généralement minimes ou absents. En cas d’hémorragie importante, l’utilisation d’une autre souris doit être envisagée.

Résultats

Figure 1 : Vues photographiques et schématiques de l’injection intra-ventriculaire (i.c.v.). (A) Aiguille utilisée pour l’injection i.c.v. (B) Schéma du crâne de la souris et du mouvement de la poi...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Resiniferatoxin	LKT Laboratories	R1774	utilisé pour les prétraitements s.c./i.c.v. et le test RTX
Sel de sodium pentobarbital	Tokyo Chemical Industry	P0776	utilisé pour l’anesthésie
Éthanol (99.5 %)	Wako Pure Chemical Industries	057-00456	utilisé pour dissoudre le
polyoxyéthylène RTX(20) Monooléate de sorbitan	Wako Pure Chemical Industries	161-21621	utilisé pour dissoudre la microseringue RTX
25 mL	Hamilton	1702LT	utilisée pour l’injection i.c.v.
Aiguille jetable de calibre 26	TERUMO	NN-2613S	utilisée pour l’injection i.c.v.